药物耐药性主要由于药物外流造成，药物外流可以由ATP结合盒(ABC)转运蛋白介导，ABC转运蛋白的高表达使药物泵出细胞外。除了药物转运外，由于药物代谢酶的活性，药动学耐药性也会出现。大多数代谢反应，大大增加了药物消除的可能性/是由少数细胞色素P(CYP)亚型介导的。
P通过其结构中的血红素中的铁离子传递电子，氧化异源物，增加异源物的水溶性，使其排出。恩萨替尼(X-)是第三代TKI，目前正在进行第二和第三阶段的临床试验，以治疗非小细胞肺癌，小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI）以阻止肿瘤细胞中细胞内信号通路的失控活性，研究表明某些TKI可能是改变ABC转运蛋白介导的外排机制的抑制剂或底物。
本工作研究了这种药物与ATP结合盒(ABC)药物外排转运蛋白和细胞色素P生物转化酶(CYPs)的可能作用。
首先，研究恩萨替尼(X-)对ABC转运蛋白对细胞内药物积累的作用，结果显示，恩萨替尼(X-)MDCKII-ABCB1细胞和MDCKII-ABCG2细胞均有明显的抑制作用，而对MDCKII-ABCC1细胞没有显著影响。对亲本细胞无任何影响。
同时作者研究了恩萨替尼(X-)对细胞色素P(CYP)亚型抑制作用。结果显示，恩萨替尼(X-)对CYP3A4和CYP2C9亚型有强烈的抑制作用，对CYP3A5、CYP2C8和CYP2C19亚型有中度抑制作用，但对CYP1A2、CYP2D6和CYP2B6亚型无明显抑制作用。同时证实了恩萨替尼(X-)调节CYP3A4介导的多西紫杉醇耐药的能力，恩萨替尼(X-)对酶高表达HepG2细胞CYP3A4中度抑制。
紧接着分子对接实验显示，恩萨替尼(X-)与ABCB1转运体向以三个配体结合位点，与ABCG2和CYP3A4均有较高亲和力。同时，恩萨替尼(X-)与ATP结合口袋结合，且恩萨替尼(X-)能显著降低了维拉帕米刺激的ABCB1ATP酶活性，增加了基线钒酸盐敏感的ATP酶活性。
实验接着证明恩萨替尼(X-)与转运蛋白的抑制相互作用来对逆转MDR易感药物柔红霉素(ABCBH1)和米托蒽醌(ABCG2)的耐药性。结果显示，恩萨替尼(X-)对分别MDCKII-ABCG2、MDCKII-ABCB1、HL60-ABCG2、HL60-ABCB1均有明显逆转作用。Chou-talalay组合指数显示，在亲本MDCKII和HL60细胞系中组合效应是拮抗的或加性的。相反，其中ABCB1和ABCG2过表达的CI值在协同范围内。
同时实验证明恩萨替尼(X-)减轻CYP3A4介导的多西紫杉醇抗性。结果显示，25uM的恩萨替尼(X-)能抑制多西紫杉醇抗性。敏化效应值显示，多西紫杉醇与酮康唑或安沙替尼的结合在亲本细胞中是拮抗的，而在CYP3A4过表达细胞中变得协同。这些结果表明，恩萨替尼(X-)可以通过与CYP3A4相互作用来调节多西紫杉醇耐药。
接下来，确定了恩萨替尼(X-)是否是一种转运体底物，因此可能成为MDR易感。双向转运实验结果显示，在对照MDCKII-PAR、MDCKII-ABCG2和MDCKII-ABCC1细胞细胞中没有观察到双向转运的不对称性。在MDCKII-ABCB1细胞中观察到r值为15.6。这种运输不对称通过添加LY(r=1.05)完全消除，证实了恩萨替尼(X-)是由ABCB1运输的。
实验进一步探讨恩萨替尼(X-)对转运体介导的MDR的可能易感性。虽然在运输实验中，恩萨替尼(X-)被证明为ABCB1底物，但在MDCKII/HL60/A-PAR细胞中，它在对ABCBl过表达的细胞中与其他细胞并无明显差异，表明ABCB1、ABCG2和ABCC1的功能过表达不会对恩萨替尼(X-)产生耐药性。
实验最后研究了恩萨替尼(X-)对mRNA水平的影响。结果显示，被测药物在任何情况下都不会增加或降低ABCB1、ABCG2、ABCC1、CYP1A2、CYP3A4和CYP2B6的mRNA水平超过%或50%。根据EMA指南，我们可以得出结论，由于基因表达的变化，恩萨替尼(X-)没有可能延续诱导的DDIs或影响肿瘤细胞的MDR。
本研究是恩萨替尼(X-)对ABC转运蛋白和CYP的抑制亲和力的实验，它在药代动力学DDIs和抗癌耐药性中起着重要作用。积累研究表明，恩萨替尼(X-)是ABCB1和ABCG2的有效抑制剂，但不是ABCC1的抑制剂。
恩萨替尼(X-)通过与单个配体结合位点相互作用来抑制ABCG2，但与ABCB1的三个结合位点相互作用。恩萨替尼(X-)还能有效地抑制重组CYP3A4和CYP2C9。但在细胞模型系统中对这种酶的作用是有限的，因为已知配体的细胞内活性受到以下因素的限制：它们的膜穿透能力、它们的分布和通过外排转运体的转运、内小体中的包裹、细胞毒性等。恩萨替尼(X-)以协同方式有效地调节ABCB1、ABCG2和CYP3A4介导的对柔红霉素、米托蒽醌和多西紫杉醇的耐药。虽然ABCBl介导的恩萨替尼(X-)转运在双向转运试验中被证明，但ABCBl高表达细胞对恩萨替尼(X-)的抗肿瘤活性没有明显的影响。
恩萨替尼(X-)是一种相对亲脂的药物，而常见的MDR易感药物，如蒽环类、米托蒽醌类药物zz叶*素毒素主要是亲水性的。在亲脂药物中，通过外排系统的适度转运速率可以通过被动扩散来抵消，这可能解释了观察到的差异。最后研究了恩萨替尼(X-)对临床相关ABC和CYPmRNA水平的影响，基于EMA指南可以得出结论，恩塞替尼(X-)不太可能持续诱导型DDIs或增强MDR抗性表型。
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